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选购PCR仪的二三事

发布时间:2017-07-26 16:21

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      那么,购买一台PCR仪,需要几步呢?
      这可并不是个轻松的差事,市场上有那么多种仪器可以选择,光是比较参数,就够累了。况且PCR仪还是实验室中的老黄牛,几乎24小时运转,买台可靠的仪器尤为重要。一想到这儿,是不是更感觉压力山大。
      在签下订单前,也许你该考虑以下五个方面。
一、终点、定量还是数字?
      如今的PCR仪器主要分为三大类:标准PCR(终点PCR)、实时定量PCR(qPCR)以及数字PCR(dPCR)。前两者大家都很熟悉,而后者是这两年冉冉升起的新星。
      标准PCR仪主要是产生大量的核酸序列供后续实验使用,比如测序、克隆,或仅仅是为了在凝胶上看看有没有合适的条带。
qPCR则是实时定量靶序列,通常被用来测定生物分子的丰度,而不是生成终产物。“有了qPCR,研究人员就不再关心PCR产物发生了什么。他们的问题是:开始时有什么?突变是否存在?”罗氏的技术服务科学家Joe Donnenhoffer谈道。
      数字PCR也是定量的,但并非实时。反应发生在大量的微小分区中。这些分区很小,其中每个可能包含0或1个DNA分子。通过计算阳性反应的数量,研究人员能够真正定量DNA。这比qPCR更为灵敏,也不需要标准曲线。
      对于标准PCR仪和定量PCR仪之间的选择,研究人员通常都心里有数。不过,说到qPCR和dPCR之间的选择,研究人员就没那么有把握了,有时也需要帮助。据Bio-Rad的高级营销经理Viresh Patel介绍,这个选择通常取决于研究人员的应用和他们想要回答的问题。“当我们听到拷贝数分析或突变检测时,数字PCR通常能提供一个更好的答案,更明确的答案,”Patel说。不过对于高通量应用,qPCR则更实际。
二、样品形式
      大多数用户以96孔形式运行PCR反应,通常使用0.2 ml PCR管。当然也还有其他形式,适合更高的通量或不同的样品量,如0.5 ml管。比比科技(Bibby Scientific)的Prime仪器允许不同大小的PCR管插在同一模块上。当同一实验室中的不同人在进行不同的PCR检测时,这特别有用。
      尽管一些PCR仪有着固定的样品模块,但很多都是可以互换的。在购买之前,我们应充分考虑未来的计划。“研究人员应避免有那种‘我们一直都用这种’的心态,考虑一下96孔模块以外的形式,”Streck的产品经理Nicole Quackenbush谈道。
      一些PCR仪允许样品模块更换成两个或多个更小的模块。这种模块化的系统就好像多台热循环仪一样,能提高效率。Veriti PCR仪专利的技术可同时运行6种不同退火温度的PCR程序,配有6个独立的Peltier加热块,使您可以在6个温度区间内进行精确的控制,比传统的梯度PCR更有效的优化反应条件。这种设计带来了灵活性,也明显缩短了优化时间。
       除了模块式的PCR之外,你还有另一个选择,那就是转子式的PCR仪,它通过加热周围的空气而控制温度。QIAGEN仪器业务的主管Carola Schade解释道:“转子式的系统就像一个烤箱。这种形式能实现明显更快的加热和冷却循环,以及更精确地达到特定温度。”
三、通量
       目前最普遍的配置是标准的96孔模块形式。不过,市场上也有更高的通量,比如384孔或1536孔的形式。
      罗氏的Donnenhoffer鼓励客户考虑他们目前的通量需求,以及5-10年后可能的通量需求。罗氏的LightCycler® 1536系统能够在1小时内同时处理1536个样品。
      其他系统,比如Bio-Rad的CFX384 Touch™实时定量PCR系统,也利用384孔形式,但增加了自动化转板的优势。据介绍,有了这个384孔的系统及自动化,你每天可运行20块板。
      一般来说,数字PCR的通量有限。Bio-Rad的QX200™微滴式数字PCR系统带有96孔。这种方法的主要优势在于更高的灵敏度和辨别力。若是需要高通量的工作,还是考虑qPCR吧。
四、便携性
      一些PCR仪器是专为便携性而设计的,让研究人员、调查人员和军事人员能够在现场或者实验室外检测特定的遗传材料。但在大多数情况下,仪器始终是摆在拥挤的实验室工作台上,这意味着体积小只是一个附加值。
      PCR仪需要某些共同的组件来维持正常功能,比如加热元件、电源和触摸屏。“因此,高性能的热循环仪具有一定的最小体积。小型化始终被限制在某种程度。”
五、用户体验
      简单易用这也很关键,不仅有利于正常运转,还能减少错误。PCR新手可能会发现如今的触摸屏仪器使用很简单。不过,高级用户可能一时还难以适应从一个PCR品牌到另一个的转换,因为他们已经习惯了特定的界面。
      软件界面对仪器的使用和整体用户体验而言至关重要,特别是对于诊断实验室。远程访问也增强了用户体验,它让用户能够调整操作并查看初步结果,而这一切都在智能手机或平板电脑上进行。
      Donnenhoffer认为,经验丰富的研究人员通常关注两个关键参数:速度和准确性。不过,对于新手而言,速度是次要的。“在一天结束的时候,你依赖的还是准确性,”他说。